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    实时荧光定量 PCR

    实时荧光定量PCR技术(Real-time Quantitative PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入可与DNA产物特异性结合的荧光基团(包括荧光染料或荧光标记的特异性探针),对PCR产物进行标记跟踪,随着PCR反应的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号,这样即可通过荧光信号强度的变化实时监测整个PCR过程中产物量的变化,并结合相应软件对产物进行分析,可以得到荧光扩增曲线,从而计算待测样品中目的基因初始模版的量,常用于分析目的基因的表达水平的变化。

    • 产品描述
    • 技术原理

      实时荧光定量PCR技术(Real-time Quantitative PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入可与DNA产物特异性结合的荧光基团(包括荧光染料或荧光标记的特异性探针),对PCR产物进行标记跟踪,随着PCR反应的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号,这样即可通过荧光信号强度的变化实时监测整个PCR过程中产物量的变化,并结合相应软件对产物进行分析,可以得到荧光扩增曲线,从而计算待测样品中目的基因初始模版的量,常用于分析目的基因的表达水平的变化。

       

       

      技术优势

      1、使用Roche LightCycler® 96实时荧光定量PCR仪,高灵敏度、高重复性、高分辨率、动力学范围广,仪器稳定性有保障,数据能够比较真实的反映出样品中RNA的相对含量变化。

      2、内参基因多样性:针对不同的物种材料,提供不同的内参设计方案,并非一律使用GAPDH或β-actin,科学的内参设计方案更加有利于提高荧光定量PCR数据可靠性。

      3、荧光定量PCR检测实验中所用的试剂耗材搭配是经过我们多年的实验经验筛选优化,大多为进口的试剂耗材,优先质量,其次是成本。

      4、多年的荧光定量PCR实验经验,批量化的流水线作业减少个体实验的误操作差异概率。

       

      交付内容

      1、RNA提取及浓度表格

      2、检测数据(默认三次重复),2-ΔΔCt分析数据

      3、相对定量比对柱状图

      4、扩增曲线及熔解曲线图

      5、荧光定量PCR检测报告

       

      案例展示

       

      实时荧光定量 PCR检测计算结果

       

      扩增曲线图

       

      熔解曲线峰图

      Q&A

       

      1、为什么扩增片段要控制在80-300bp范围内?

      由于引物二聚体的存在,扩增序列太短的情况下容易导致与引物二聚体难以区分;扩增序列太长容易导致扩增效率下降,检测结果准确度下降。

       

      2、相对定量与绝对定量?

      绝对定量是指通过qPCR直接计算出待测样本的初始拷贝数量;

      相对定量是指指定样品的目的基因想对于另一对照组样本量的变化。

       

      3、提供对照组为什么还需要提供内参

      很多人会有这样的疑问,为什么提供对照组还要确认内参基因,在QPCR中,需要加入内参基因校准正,消除不同样本在RNA产量、质量以及逆转录上可能存在的差别,从而获得目的基因特异性表达的真正差异。而对照组则用于实验结果分析中相对表达量的计算。

       

       

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